12
3.8.5. Analiza densytometryczna
Analizę jakościową oraz ilościową α-solaniny na chromatogramach prowadzono
densytometrycznie w świetle dziennym z zastosowaniem TLC-Vizualizer`a firmy Camag (Szwajcaria),
z wykorzystaniem
oprogramowania
winCATS
1.4.9.2001
(archiwizacja
chromatogramów)
oraz techniki Videoscan (analiza jakościowa i ilościowa).
3.8.6. Walidacja metody
3.8.6.1. Identyfikacja α-solaniny
Identyfikację α-solaniny w badanych surowcach roślinnych prowadzono w oparciu
o porównanie współczynników opóźnienia R
f
substancji wzorcowej ze współczynnikami R
f
składników
próby badanej oraz próby badanej wzbogaconej dodatkiem solaniny (spiked sample).
3.5.7.2. Liniowość
Liniowość metody określono poprzez analizę serii rozcieńczeń roztworu α-solaniny.
Na podstawie zależności pól pików od stężenia wzorca wyznaczono zakres liniowości, równania
regresji oraz współczynnik korelacji r. Każdorazowo na płytce chromatograficznej wzrastające ilości
roztworu wzorcowego rozwijano równolegle z badanymi próbami.
3.5.7.3. Limit wykrywalności (DL) i oznaczalności (QL)
Na płytkę chromatograficzną nanoszono od 100 ng/pkt – 3000 ng/punkt substancji
wzorcowej, w duplikatach. Za limit wykrywalności przyjęto ilość związku (ng/pasmo) odpowiadającą
stosunkowi sygnału do szumu S/N = 3. Za limit oznaczalności uznano ilość związku (ng/pasmo)
odpowiadającą stosunkowi S/N = 10.
3.5.7.4. Powtarzalność
Powtarzalność metody wyznaczono:
I) poprzez 9-krotną analizę tego samego pasma na płytce chromatograficznej
II) poprzez analizę 9 pasm tej samej próbki na 1 płytce chromatograficznej