6
3.5. Próby analityczne wzbogacane substancjami wzorcowymi (spiked samples)
Próby roślinnego materiału badawczego wzbogacone wzorcami i wykorzystane podczas
walidacji ilościowych oznaczeń chromatograficznych przygotowywano poprzez dodatek roztworu
wzorca do odpowiedniej naważki sproszkowanego surowca (procedura walidacji 3.7.7.; 3.8.6).
Ekstrakcję poszczególnych matryc roślinnych prowadzono wg opisu zawartego w częściach protokołu:
3.4.1 i 3.4.2
3.6. Przechowywanie prób
Pomiędzy analizami matryc roślinnych, wykonanymi w różnych dniach, gotowe próbki,
przygotowane wg opisu przedstawionego w części 3.4., przechowywano w temp. -20
o
C.
Bezpośrednio przed analizą chromatograficzną oczyszczone wyciągi doprowadzano do temperatury
pokojowej (21
o
C), a następnie umieszczano w łaźni ultradźwiękowej na 1 min. w celu rozpuszczenia
osadu wytrąconego w niskiej temperaturze.
3.7. Analiza alkaloidów tropanowych w owocach goji z wykorzystaniem wysokosprawnej
chromatografii cienkowarstwowej (HPTLC)
3.7.1. Płytki chromatograficzne
Analizy chromatograficzne przeprowadzono z zastosowaniem płytek szklanych pokrytych
żelem krzemionkowym (HPTLC Silica gel 60 F₂₅₄, Merck, Darmstadt, Niemcy), o rozmiarach 5 x 20 cm.
Przed użyciem płytek nie kondycjonowano.
3.7.2. Aplikacja próbek
Oczyszczone wyciągi roślinne oraz roztwory wzorcowe nanoszono na płytki
chromatograficzne przy użyciu półautomatycznego aplikatora AS 30 (Desaga, Lindenfels, Niemcy), wg
poniższych parametrów:
- odległość linii startowej od dołu płytki: 5 mm
- szerokość pasma: 0 mm (nanoszenie punktowe)
- odległości pomiędzy pasmami: 7 mm
- objętość strzykawki dozującej: 10 μl
- dozowana objętość próby: 5,0 μl